脂質プロファイスポーツベットアイオー 登録グの仕組み

2 つのスポーツベットアイオー 登録分析の間に衝突セル (断片化が発生するチャンバー) を備えたタンデムスポーツベットアイオー 登録分析計を使用します ("トリプルクワッド"; 当社には Applied Biosystems API 4000 と Applied Biosystems Q-TRAP があります, これは「トリプルクワッド」でもあります). サンプル紹介はエレクトロスプレー イオン化です. 事前分離は使用されません. 極性脂質プロファイルを取得するために 2 種類のスキャンが使用されます: 前駆体 (Preci) スキャンとニュートラル ロス (NL) スキャン. スキャンは特定の脂質クラスに固有; 一部のクラスはプリカーサー スキャンでスポーツベットアイオー 登録されます, その他はニュートラルロススキャンでスポーツベットアイオー 登録されます. サンプルは溶媒中の連続注入によってエレクトロスプレー イオン化源に導入されます, 脂質分子イオンが脂質分子から生成される場所. 現在の方法では, パソコン, リソPC, SM, 追伸, PE とリゾ PE は一価の陽性 [M+H] としてスポーツベットアイオー 登録されます⁺ イオン, MGDG, DGDG, PG, PI, PA, PS は単一電荷 [M + NH4] としてスポーツベットアイオー 登録されます⁺ スポーツベットアイオー 登録, リソPGは陰性[M-H] ^- イオン. 分析に利用できるイオンは、脂質が溶解している溶液と電源電圧に依存します. イオンは気相でスポーツベットアイオー 登録分析計に入る.

四重極スポーツベットアイオー 登録分析計の内部, イオンは電場の中にあります. 特定の電界強度において, 特定のスポーツベットアイオー 登録/電荷比のイオンは、タンデムスポーツベットアイオー 登録分析計のイオン経路の終端にある検出器に向かってまっすぐに移動します. スキャン中, または、電界強度を体系的に変化させると、信号 (検出器でのイオンヒット) と のプロット (スペクトル) が生成されます。. スポーツベットアイオー 登録/電荷 (電界強度と相関). 脂質の場合, 料金はほとんどの場合 1, つまり、スポーツベットアイオー 登録/電荷 = スポーツベットアイオー 登録. 1 台の四重極スポーツベットアイオー 登録分析計で組織または細胞抽出物中のイオンをスキャンすると、多くのピークが生成されます, 脂質のいくつかの分子種を表すいくつかのピークを伴う (i.e., 同じスポーツベットアイオー 登録を持つ異なる脂質分子種). 前駆体スキャンまたはニュートラルロススキャンにより、特定のヘッドグループクラス内の種の特異的検出が可能になり、個々の脂質分子種の同定と定量化が可能になります.

前駆体スペクトル (スキャン) の場合, 極性脂質頭部基から生成される特徴的な荷電フラグメントに対応するスポーツベットアイオー 登録を持つイオンのみが検出器に移動できるようにする一定の電場で 2 番目のスポーツベットアイオー 登録分析を設定します. 次に最初のスポーツベットアイオー 登録分析でスキャンします. 2 番目のスポーツベットアイオー 登録分析は効果的に「フィルター」として機能するため、最初のスポーツベットアイオー 登録分析からの分子イオンが特徴的な頭部グループのフラグメントを生成した場合にのみ検出器で「ヒット」が確認されます. したがって, スペクトルは、そのヘッドグループフラグメントを持つスポーツベットアイオー 登録のみを示しています. 通常、これは 1 つの頭部グループ クラスのスポーツベットアイオー 登録に対応します.

中立損失スペクトルも単一クラスの脂質を示します, しかし、断片化後に電荷が脂質頭部グループに局在しない場合、このタイプのスペクトルが得られます. これらの脂質では, 生成されるジアシルグリセロール イオンのスポーツベットアイオー 登録は、分子イオンのアシル組成の関数として変化します, ただし、分子イオンと荷電した DAG フラグメントのスポーツベットアイオー 登録の差は一定です (頭部基に対応). だから, 中性頭基フラグメントのスポーツベットアイオー 登録に対応する電場オフセットを使用して、最初のスポーツベットアイオー 登録分析と同期した 2 番目のスポーツベットアイオー 登録分析でスキャンします. プリカーサー スキャンと同様, 最初のスポーツベットアイオー 登録スペックが、頭部基の特徴的な中性損失を生成するスポーツベットアイオー 登録に対応する電界強度にある場合にのみ、検出器でヒットが確認されます.

すべてのスペクトルは、2 番目のスポーツベットアイオー 登録分析 vs の後に配置された検出器での信号のプロットです. 最初のスポーツベットアイオー 登録分析によってスキャンされた分子イオンスポーツベットアイオー 登録.

一連のプリカーサーとニュートラルロスのスキャンが順番に実行されます (下の表を参照).

連続して実行されるスキャン機能

スキャン モード	前駆体またはニュートラル損失フラグメント	スポーツベットアイオー 登録クラスが検出されました
+	規則 184	PC/リソPC/SM
+	NL 141	PE/リソPE
+	NL 185	追伸
+	NL 277	PI
+	NL 189	PG
+	NL 115	PA
+	NL 179	MGDG
+	NL 341	DGDG
-	規則 153	リソPG

分子種は、(1) 特定の頭部基フラグメントの存在および (2) スポーツベットアイオー 登録によって識別されます. スポーツベットアイオー 登録により、一般に特定のアシル炭素数と二重結合の数を割り当てることができます.

「同位体重複」のデータに修正が適用されます. この現象は、天然存在量の約 1% による ¹³C. これは炭素数 50 の分子イオンを意味します, たとえば, 1 つも生成されません, しかし一連のピーク: (1) 「公称」スポーツベットアイオー 登録のピーク, A; (2) A+1 のピーク, 1 つを含む種から ¹³C原子, A ピークの信号の 56% を含む; (3) A+2 のピーク, 2 つを含む種から ¹³C 原子, A ピークの信号の 15% を含む; (4) A+3 のピーク, 3 つを含む種から ¹³C 原子, A ピークの信号の 3% を含む. 脂質種における二重結合の有無はわずか 2 スポーツベットアイオー 登録単位の違いを引き起こすため, ある種の A+2 ピークは、別の (より飽和した) 種の A ピークと同じスポーツベットアイオー 登録のシグナルを生成します. 2 番目のピークのシグナルに対する A+2 種の寄与を差し引く必要があります. これが同位体の重複を補正することを意味します.

これらの修正後, スペクトルのピークは 定量化された あるグループと比較して 内部標準。 一般的に, 各ヘッド グループ クラスの 2 つの内部標準が使用されます. また、内部標準混合物中の低レベルの汚染物質に起因する可能性のあるシグナルを差し引くために最善を尽くします.

カンザス リピドミクス研究センタースポーツベットアイオー 登録研究所のユーザーは、データの正規化のために重みやその他の値を提供してくれる場合があります. 各脂質分子種のデータは、スポーツベットアイオー 登録された総脂質の nmol (重量あたり) および/または mol% として表示されます.

私たちが日常的に利用しているプリカーサーとニュートラルロスの方法論は、最初のスポーツベットアイオー 登録スペクトルが一定の電場に保たれる、より一般的に使用される「プロダクト」イオンスキャンとは対照的です, 特定の分子イオンスポーツベットアイオー 登録に対応する, 衝突セルで生成されたフラグメントを検出するために 2 番目のスポーツベットアイオー 登録分析でスキャンが実行されている間. プロダクト イオン スキャンを使用して、生成される頭部グループまたはその他のフラグメントを決定できます, 特定の極性脂質分子種における脂肪アシル基を同定するためにも, この追加の分析が必要な場合.

参考文献:

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