スポーツベットアイオー 登録州立大学

単子葉植物の スポーツベットアイオー 登録 単離

1. 新鮮な組織を採取し、スポーツベットアイオー 登録.
2. 事前に冷却した乳鉢で液体窒素を使用して葉のスポーツベットアイオー 登録を微粉末に粉砕します [乳鉢と乳棒は-20°Cまたは-80°Cで保管します].
3. 冷えた絵筆を使って粉砕した組織をよく冷えた絵筆に移す, 50 ml ポリプロピレンチューブ、スポーツベットアイオー 登録.スポーツベットアイオー 登録を解凍しないでください.すべてのツールは液体窒素で冷却する必要があります.
4. 抽出緩衝液に亜硫酸水素ナトリウムを加え、5N NaOHでpHを7に調整します.8–8.0. スポーツベットアイオー 登録を 65°C に加熱し、15 ～ 20 ml を 10 ～ 15 ml の凍結組織に加えます. よく混ぜる.

1. 65°C のウォーターバスで 30 分間インキュベート; 5 ～ 10 分ごとにスポーツベットアイオー 登録を反転.
2. クロロホルム:イソアミルアルコール [24:1 v/v] をスポーツベットアイオー 登録の上部に加え、激しく混合します.
3. 4 で 15 分間遠心分離,500 rpm. 2 ～ 4 層のチーズクロスに流し込んで上相を新しい 50 ml スポーツベットアイオー 登録に移すか、中間相が固体に見えない場合はピペットで上相を取り除きます.
4. 2 倍量 (チューブの上部まで満たす) の冷 [-20°C] 95% EtOH を加え、穏やかに混合して スポーツベットアイオー 登録 を沈殿させます. -20°C に 30 ～ 60 分間置く.
5. 95% EtOH を注ぎ出す, 新鮮な 70% EtOH で洗浄, そして冷70% EtOH 30 mlを加えます. 数分間穏やかに混ぜます. スポーツベットアイオー 登録 は 70% EtOH に無期限に放置可能 [-20°C で一晩放置可能].
6. スポーツベットアイオー 登録 がまだ変色している​​場合は、新しい 70% EtOH で再洗浄します. スポーツベットアイオー 登録 をパスツール ピペットに引っ掛けて除去し、キムワイプで余分な 70% EtOH を拭き取ります. スポーツベットアイオー 登録 を滅菌容器の底に移す 1.5 ml 微量遠心管. 多数の抽出を行う場合, 湿った スポーツベットアイオー 登録 を静かに遠心分離します, その後、チューブを数分間逆さにして液体を排出します. スポーツベットアイオー 登録 を室温で 2 ～ 3 時間乾燥させます.
7. スポーツベットアイオー 登録を溶解するスポーツベットアイオー 登録済みテ [0.ペレットのサイズに応じて 5 ～ 1 mL]. 30 ～ 60 分ごとに穏やかに反転させながら溶解するまで、または スポーツベットアイオー 登録 が溶解するまで、65°C のウォーターバスでインキュベートします [数時間かかる場合があります].
8. 13 の微量遠心分離機で 10 分間遠心分離します,000 rpm で溶液にならない物質を除去.
9. アガロースゲル上で 1:20 希釈 [1 スポーツベットアイオー 登録:20 TE:1 ローディング緩衝液] をマーカー (濃度 10 の未切断ラムダ スポーツベットアイオー 登録) とともに分離して スポーツベットアイオー 登録 濃度を決定します。, 20, 50, および 80 ng). 0 でジェルを染色する.5 μg/ml の臭化エチジウム 15 分間と写真. スポーツベットアイオー 登録 バンドの強度をマーカーと視覚的に比較して濃度を決定します.