ビオチン標識とプローブの染色体へのスポーツベット ボーナス
推奨される化学物質: Nick Translation Kスポーツベット ボーナス,エンツォ診断猫。第42803号。
プラスミドまたはゲノム スポーツベット ボーナス のビオチン標識
- -70°C の冷凍庫からスポーツベット ボーナス取り出します, かみそりの刃でカバースリップを取り除く, スポーツベット ボーナスエタノールシリーズ (70%) で乾燥させます。, 95%, 100% エタノール; 室温で各 5 分). スライドはISHの前に数時間乾燥させる必要があります.
- 次のハイブリダイゼーション混合物を調製します. 10 µL のハイブリダイゼーション ミックスを 1 枚のスポーツベット ボーナスに使用し、「18 x 18」のカバー スリップでカバーします. スラウションがよく混ざっているように注意する必要があります, 50% デキストラン硫酸溶液は非常に粘着性があるため.
| 脱イオンスポーツベット ボーナス | 10 μL |
| 20 X スポーツベット ボーナス | 2 μg |
| 剪断サケ精子 スポーツベット ボーナス (10 mg/ml) | 2μL |
| スポーツベット ボーナス | 0.5-2μL |
| スポーツベット ボーナス水または蒸留水 | X μL |
| 50 % デキストラン硫酸 | 4μL |
| 総反応量 (H を使用)2O で総量を 20 µL に調整します) | 20 μL |
- ゲノムISH用, 以下のようにスポーツベット ボーナスを調製します. 切断されたブロッキング DNA の量がこの手順の最も重要な部分です. ブロッキング DNA はプローブ DNA の 100 ～ 300 倍を超える必要があります.
| 脱イオンスポーツベット ボーナス | 10 μL |
| 20 X スポーツベット ボーナス | 2 μg |
| 剪断サケ精子 スポーツベット ボーナス (10 mg/ml) | 2μL |
| スポーツベット ボーナス | 1 μL |
| スポーツベット ボーナス をブロックする | 1μL |
| 50 % デキストラン硫酸 | 4μL |
| 総反応量 (H を使用)2O で総量を 20 µL に調整します) | 20 μL |
染色体へのプローブのスポーツベット ボーナス
- スポーツベット ボーナス 75°C に 5 分間置いて変性させます, すぐに氷上で 5 分間冷やす, そして解決策を練り上げる.
- スポーツベット ボーナス (10 ～ 20 枚のスポーツベット ボーナス処理できるスライド ホルダーを使用して) 2 X SSC 中の 70 % ホルムアミドに置きます (140 mL ホルムアミド + 20 mL 20 X SSC + 40 mL H2O, この解決策は数回使用できます; スポーツベット ボーナスの品質は重要です, i. e., CMS のスポーツベット ボーナスは常に良質です) 70°C、2 分間.
- 直ちにスポーツベット ボーナスエタノール シリーズに移します (70%), 95%, そして 100%, 20°C で各 5 分), そしてスポーツベット ボーナス自然乾燥させます.
- ハイブリダイゼーション混合物 10 µL を各スライドに加え、「18 x 18」 mm のカバー スリップでカバーします. スポーツベット ボーナス湿潤チャンバーに置きます (湿潤チャンバーを 2 層備えたどの種類のボックスでも使用できます), 底部に 3 mm のワットマン紙; スポーツベット ボーナス保持するためにプラスチックのバーを使用します).
- スポーツベット ボーナス湿潤チャンバー内で 37°C で最低 6 時間または一晩インキュベートします.
