メンブレンの洗浄とストライピング手順
膜の洗浄
- ハイブリダイゼーションオーブンからボトルを取り出し、溶液を放射性廃棄物容器に捨てます.
- ボトルから膜を取り出し、プラスチックの箱に入れます. 2X スポーツベット ボーナスPE で膜を洗浄. 各[小さな部品]の間にナイロンメッシュを配置して膜を分離します。, 株式会社., CMN-300-D].
- 洗浄液を 65°C に予熱し、メンブレンの入ったボックスに加えます. 箱を 65°C の水槽に置きます.
- 2X スポーツベット ボーナスPE で 30 分間洗浄, 1X スポーツベット ボーナスPE で 30 分, 0 で 30 分.5X スポーツベット ボーナスPE.
2X スポーツベット ボーナスPE| 在庫 | 1.0L | 2.0L |
|---|
| 20X スポーツベット ボーナスPE | 100mL | 200mL |
| 20% SDS | 25mL | 50mL |
| ddH20 | 875mL | 1,750mL |
1X スポーツベット ボーナスPE| 在庫 | 1.0L | 2.0L |
|---|
| 20X スポーツベット ボーナスPE | 50mL | 100mL |
| 20% SDS | 25mL | 50mL |
| ddH20 | 925mL | 1,850mL |
0.5X スポーツベット ボーナスPE| 在庫 | 1.0L | 2.0L |
|---|
| 20X スポーツベット ボーナスPE | 25mL | 50mL |
| 20% SDS | 25mL | 50mL |
| ddH20 | 950mL | 1,900 mL |
- 最後の洗濯後, フィルターを配置, DNA 側を上に, 3MM ゲルブロット紙上. 液体が蒸発したら[長時間乾燥させないでください], 膜を Sigmacote [Sigma SL-2] で前処理したプラスチック シート プロテクターに置きます.
- 信号 [400 ～ 800 cpm] をガイガーカウンターで確認.
- 暗室で, ラベルの付いた X 線カセットにメンブレンを入れ、X 線フィルムを追加します. カセットを -80°C に置き、4 ～ 5 日間放置します.
- 標準手順に従ってフィルムを現像.
膜剥離
0 の溶液を注いで膜を剥がす.5M NaOH をフィルターに加え、穏やかに振盪しながら室温で 1 時間洗浄します. 蒸留水で 1 回洗浄し、次に 2X スポーツベット ボーナスPE で洗浄します. 次回使用するまでメンブレンを 2X スポーツベット ボーナスPE 中で 4°C [冷蔵庫] に保管します.
