ゲノム in situ ハイブリダイゼーション (GISH) のための植物ゲノム スポーツベットアイオー ログイン の単離
- スポーツベットアイオー ログインの葉組織 5 g を液体窒素中で粉砕し (スポーツベットアイオー ログイン材料は解凍しないでください)、粉末を 250 mL フラスコに注ぎます.
- 粉末材料を 15 mL の スポーツベットアイオー ログインーに懸濁し、ゆっくりと振盪しながら 65°C のウォーターバスで 1 時間インキュベートします.
- スポーツベットアイオー ログインは 1.4M 塩化ナトリウム, 100 mM トリス pH 8.0, 2% CTAB (臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム), 20 mM EDTA, 0.5% 水硫化ナトリウム, 1% 2-メルカプトエタノール (2-me).
- スポーツベットアイオー ログインを作成するとき, 2-me 以外の他の成分が溶液になった後に NaCl を添加することをお勧めします. 使用直前まで2-meを追加しないでください.
- 2-me を含まない溶液はスポーツベットアイオー ログイン保存できます.
- フラスコを室温まで冷まします, 15 mL のクロロホルム/イソアミル アルコール (24:1) を加え、エマルジョンが形成されるまでフラスコをかき混ぜます (フラスコをロータリー シェーカー上に置き、スポーツベットアイオー ログイン置きます).
- サンプルを遠心管に入れ、10 度で回転させます,000 rpm、スポーツベットアイオー ログイン.
- 上清をきれいなチューブに移し、2/3 量のイソプロピル アルコールを加えます; チューブを数回反転させます; 沈殿した スポーツベットアイオー ログイン を取り出す; きれいな 10 mL チューブに移す.
- スポーツベットアイオー ログイン ペレットを 70% エタノールで 2 回洗浄します. エタノールを注ぎ、ペレットを 1 時間自然乾燥させます.
500 µL の TE を追加し、スポーツベットアイオー ログイン を 1 に移します。.5 mL チューブ; 5 µL RNase A (10 mg/mL) を加え、4°C で一晩または 37°C で 1 時間放置します. - 500 µL のフェノールを追加, よく混ぜる, そして 5 分間回転; スポーツベットアイオー ログイン.
- フェノールとクロロホルムをそれぞれ 250 µL 追加します, よく混ぜる, そして 5 分間回転; スポーツベットアイオー ログイン.
- 500 µL クロロホルムを追加, よく混ぜる, そして 5 分間回転; 上清を 10 mL スポーツベットアイオー ログインに移す.
- TE を最終容量 3 mL まで追加, その後、1/10 容量の 3 M NaAc と 2 容量の 100% エタノールを追加します. スポーツベットアイオー ログインを数回反転させます.
- 沈殿した スポーツベットアイオー ログイン を 70% エタノールで 2 回洗浄します; dスポーツベットアイオー ログイン を 1 に転送.5 mL チューブ; スポーツベットアイオー ログイン ペレットを乾燥させる; 500 ml TE に溶かします.
- 原則として, ゲノム スポーツベットアイオー ログイン がきれいであればあるほど, ビオチン標識プローブの方が優れている. したがって, 単離された スポーツベットアイオー ログイン は、CsCl 精製手順を使用してさらに精製できます. しかし, 上記のプロトコールに従って単離された スポーツベットアイオー ログイン の品質は、私たちの研究室の GISH に十分です.
- 分光光度計を使用するか、ミニゲルでの電気泳動によって スポーツベットアイオー ログイン 濃度を測定します.
