スポーツベットアイオー ボーナス州立大学

プレハイブリダイゼーションとスポーツベットアイオー ボーナスの標識

プレハイブリダイゼーション

1. ハイブリダイゼーション オーブンを 65°C に設定.
2. 解ける³²フード内の P 同位体。
3. メンブレンをハイブリダイゼーションスポーツベットアイオー ボーナス置きます.
4. 50 mL のプレハイブリダイゼーション バッファーを各スポーツベットアイオー ボーナス追加します.

プレハイブリダイゼーションバッファー[スポーツベットアイオー ボーナス 4 個の場合]

ddH20	125mL
20X SSPE	60mL
スポーツベットアイオー 出金 10 分間かき混ぜます.,溶液を	10mL
20% SDS	5mL
サケの精子の DNA[10 mg/mL; 5分間煮て、加える5分前に氷上に置く]	1mL
合計	200mL

1. メンブレンを少なくとも 6 時間から一晩プレハイブリダイズする.

スポーツベットアイオー ボーナスのラベル付け

1. ホットプレート上のビーカーに水を入れ沸騰するまで加熱する.
2. ラベル付けコンポーネントは

コンポーネントのラベル付け

DNA	1.0 µL [20–50 ng]
ddH20	4.0 µL [H の総量]20 およびスポーツベットアイオー ボーナス = 5 µL]
オリゴプライマー	1.0 μL
dNTP [5 mM]	1.5μL
クレノウポリメラーゼ	1.0 μL
10X クレノウ バッファー	1.5μL
dCTP32P	5.0μL
合計	15.0μL

1. ddHを結合する₂0, オリゴプライマー, そして 1 の DNA.5 ml 微量遠心管, 4分間煮る, そして氷の上に置きます.
2. dNTP を追加, 10X バッファ, クレノウ酵素, そして³²P. ミックス, 軽く回転する, 室温で一晩反応させるか、37°C​​ で 2 時間放置します.

カラムの準備

1. 1 mL シリンジの底にグラスウールを加え、15 mL 遠沈管に入れます.
2. 移送ピペットの使用, 注射器に次の溶液を満たしてくださいセファデックス G-50TE で. カラム内に気泡が入らないようにする.
3. チューブを約 30 秒間遠心分離します, 新しいものをスポーツベットアイオー ボーナス補充セファデックス G-50解決策, そして 1 で遠心分離します,500 RPM 4 分間.
4. 200 µL の TE を各カラムに追加し、1 で 4 分間遠心分離します,500 RPM.

スポーツベットアイオー ボーナスの精製

1. 各スポーツベットアイオー ボーナスに 185 µL の TE を追加.
2. チューブのキャップを切り取り、ピペットでチューブからすべてのスポーツベットアイオー ボーナス溶液を抜き取ります. 空のチューブをシリンジの下に置き、スポーツベットアイオー ボーナスをカラムの上部に追加します.
3. 1 でカラムを 4 分間回転させます,500 RPM.
4. 列を破棄; 精製スポーツベットアイオー ボーナスを使用してチューブを取り外し、キャップを再度取り付けます.
5. チューブにキャッスポーツベットアイオー ボーナスックを追加する, 4分間煮る, そして氷の上に置きます.