in situ ハイブリダイゼーション (ISH) 用のブックメーカー おすすめ調製と精製
推奨される化学物質: Nick Translation Kブックメーカー おすすめ,エンツォ診断猫。第42803号。
プラスミドまたはゲノム DNA のブックメーカー おすすめ
- 次のハイブリダイゼーション混合物を調製します.
| dNTP (ブックメーカー おすすめ-11-dUTP を含む) | 5μL |
| プラスミドまたはゲノム ブックメーカー おすすめA | ブックメーカー おすすめ |
| ブックメーカー おすすめA ポリメラーゼ I | 5μL |
| ドナース I | X μL |
| 脱イオン水または蒸留水 | Y μL |
| 総ブックメーカー おすすめ量 (H を使用)2O で総量を 20 µL に調整します) | 50μL |
- ブックメーカー おすすめチューブをウォーターバス内で 14 ～ 15°C で 2 時間インキュベートします.
- 5 µl の停止バッファーを加えてブックメーカー おすすめを停止します.
ラベル付けの最も重要な部分, DNA がクリーンな場合, 最終的なニックトランスレーション製品のサイズ. ビオチン標識プローブのサイズが約 300 ～ 600 bp の場合、最良の ISH 結果が得られます. プローブのサイズを決定するには, ニックトランスレーション産物 15 µL を熱湯中で 4 分間変性, すぐに氷上で冷やす, DNA サイズ マーカーを備えたミニゲル上でサンプルを電気泳動します. ニックトランスレーション産物のサイズは、反応溶液に異なる量の DNase I を添加することで調整できます. ランダムプライマー標識はビオチン標識にも使用可能, ただし、ブックメーカー おすすめニックトランスレーションによって制御するのが比較的簡単です.
ブックメーカー おすすめ精製
- ブックメーカー おすすめ インキュベーション終了の 20 分前, 1 mL ツベルクリン注射器の底にシリコン処理したグラスウールを差し込む.
- 滅菌パスツールピペットを使用して、注射器の上部までセファデックス G-50 をブックメーカー おすすめします.
- ブックメーカー おすすめ充填したシリンジを 15 mL Corex チューブに入れ、1 で遠心分離します,ブックメーカー おすすめ圧縮するために 4 分間 500 rpm.
- ブックメーカー おすすめセファデックス カラムの総量が約 0 になるまで、前の 2 つの手順を繰り返します.9mL.
- 1 で回転させ、5ブックメーカー おすすめ TE でカラムを 2 回洗浄します,500 rpm、各 4 分間.
- 滅菌済みの 1 を置きます.5 mL チューブを 15 mL Corex チューブの底に置き、充填および洗浄したシリンジを、シリンジの先端が Corex チューブに収まるように挿入します。1.5 mL チューブ. ニックトランスレーション生成物 (ストップバッファーを含む 55 µL) をロードし、1 でスピンします,500 rpm 4 分間. ブックメーカー おすすめは 1 に収集されます.5 mL チューブ.
プローブの最終容量は 55 µL 近くになるはずです. 通常, このようなビオチン標識プローブ (1 μg/55 μL = 18 ng/μL) は 5 μL で 1 枚のスライドに十分です, プローブを使用して 100 枚のスライドを処理できます. ブックメーカー おすすめミニゲル上の電気泳動で確認できます, スピンカラム精製の前または後. プローブは冷凍庫で数年間保存可能.
