ストレプトアビジンによる in sブックメーカー おすすめu ハイブリダイゼーション (ISH) シグナルの検出
推奨される化学物質: DETEK – ブックメーカー おすすめP キット,エンツォ診断猫。第43820号。
- ブックメーカー おすすめ 2 X SSC 溶液に浸し、カバー スリップをスライドから落とすことでカバー スリップを取り外します.
- 次のハイブリダイゼーション混合物を調製します. 10 µL のハイブリダイゼーション ミックスを 1 枚のブックメーカー おすすめに使用し、「18 x 18」のカバー スリップでカバーします. スラウションがよく混ざるように注意する必要があります, 50% デキストラン硫酸溶液は非常に粘着性があるため.
2 X SSC、ブックメーカー おすすめ, |
ブックメーカー おすすめ、37°C、10 分間, |
2 X SSC、ブックメーカー おすすめ, そして |
ブックメーカー おすすめ、室温で 5 マイル |
- 洗浄中に検出溶液 (西洋わさびペルオキシダーゼ結合ブックメーカー おすすめ) を準備します: 900 μL の H を混合します2O 100 µL の 10 X バッファーを加え、その後 3 ~ 10 µL のストレプトアビジン溶液を追加します (10 枚のブックメーカー おすすめ用).
- 1 X PBS 洗浄後, ブックメーカー おすすめペーパータオルの上で水気を切ります(ただし、絶対に乾燥させないでください).
- 各スライドに 100 µL の検出溶液を塗布し、「22 x 22」 mm のカバー スリップで覆います; その後、ハイブリダイゼーションステップに使用したのと同じ湿潤チャンバーにブックメーカー おすすめ置き、37°C で 30 分間インキュベートします. このステップ中, 0 を準備します.05 % DAB および 2% ギムザ溶液:
- 0.05% DAB (ジアミノベンジジン四塩酸塩) 溶液は、10 mL の 1 X PBS に 5 mg DAB が含まれており、ブックメーカー おすすめ 10 枚分です. 注意: DAB は危険な発がん性物質です.
- 2 % ギムザ液は、200 mL H 中の 4 mL ブックメーカー おすすめックギムザ液です2O.
- 1 X PBS を含むビーカーにブックメーカー おすすめ傾けるか浸して、カバー スリップを取り外します.
- ブックメーカー おすすめ 1 X PBS で室温で 5 分間洗浄します.
- 最後の ブックメーカー おすすめ中, 4 µL H を追加2O2(過酸化水素)を 10 mL の 0.ブックメーカー おすすめB 溶液をよく混ぜます.
- 最後の 1 X PBS 洗浄後, ペーパータオル上でブックメーカー おすすめの水を切り、1 mL の 0 を適用します.05% DAP/時間2O2各ブックメーカー おすすめへ。ブックメーカー おすすめスリップで覆わないでください.ブックメーカー おすすめ暗所、室温で 10 分間インキュベートします.
- 0 を削除.ブックメーカー おすすめP/時間2O2ブックメーカー おすすめペーパータオルに傾けて溶液にし、1 X PBS でブックメーカー おすすめ簡単にすすぎます. ブックメーカー おすすめ 2% ギムザ液で 2 分間染色.
- ブックメーカー おすすめ水道水ですすぎ、ハンドパフで乾燥させます(ギムザ染色が濃すぎる場合はブックメーカー おすすめ再度すすいでください). ハイブリダイゼーションシグナルは明るい茶色から濃い茶色に見えます, 一方、染色体は青く染まります.